ELISA间接法实验试剂配制

ELISA酶联免疫吸附试验的标准程序，通常是把蛋白、抗体、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗体（captureAb）固定在固相载体上，再加入一级检测抗体（primarydetectionAb），形成一个抗原抗体的复合物。ELISA间接法实验原理是将抗原直接固定在固相载体上，用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量，此一级抗体的特异性非常重要。

ELISA间接法实验试剂配制如下：

1.抗原及酶标记抗体

①抗原：IgG

②酶标抗抗体：羊抗鼠IgG-HRP

2.包被液（CBS）：Na2CO30.8g，NaHCO31.46g，水溶解，定容ml。

3.封闭液（3％BSA+CBS或5％牛奶+CBS）：含3％牛血清白蛋白（BSA）：10mLCBS中加入0.3gBSA。含5％荷兰牛奶：10mLCBS中加入0.5g牛奶。

4.洗涤液（PBST10*）：KH2PO44g，Na2HPO4·12H2O58g，NaClg，KCl4g，Tween-mL加水定容2L。

5.洗涤液(1*PBS)：PBST：H2O=1：9

6.底物溶液（4甲基酰苯an）

①TMB底物缓冲液(0.mol/LPH3.6醋酸钠-柠檬酸缓冲液)：称NaAc·3H2O：1.13g，C6H8O7·H2O：1.05g，用蒸馏水溶解，定容至mL，调PH=3.6。

②TMB底物液：称3,3＇,5,5＇-四甲基联苯胺（TMB）0.08g溶于40mL二甲基亚砜（DMSO）中，加60mL甲醇，混匀，加mL底物缓冲液，在暗处避光搅拌2小时至溶解，4℃避光保存。

③H2O2底物液：取μL过氧化氢（H2O2）加入mL底物缓冲液混匀。

④底物应用液：现用现配，TMB:H2O2=1:1混匀。

7.终止液：2mol/LH2SO4

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